薬学および薬学研究ジャーナル オープンアクセス

抽象的な

血液がん治療のためのより優れたバイオ医薬品を提供するための新しいL-アスパラギナーゼのバイオプロスペクティングと合理的なエンジニアリング

テイルズ A コスタ＝シルバ、IM コスタ、GS アガメス＝モンタルボ、A ペソア、G モンテイロ

はじめに: 細菌によって生成される L-アスパラギナーゼ (EC3.5.1.1) は、急性リンパ性白血病 (ALL) の治療に使用されます。しかし、細菌 L-ASNase を ALL 治療に使用した場合、数え切れないほどの副作用が報告されています。原核生物 L-アスパラギナーゼ治療に関連するその他の欠点としては、過敏症反応、熱安定性の低さ、ヒトプロテアーゼの分解、および急速なクリアランスが挙げられます。

目的: これらの欠点を克服するために、真核生物源の生物学的探査や、部位特異的変異誘発による市販の細菌 L-アスパラギナーゼの改変などのいくつかの技術が使用されてきました。L-ASNase の真核生物源を見つけるために、この研究ではクラゲ Olindias sambaquiensis の微生物叢から分離された 20 種類の糸状菌を使用しました。

結果: クラゲの触手(クラゲの毒素産生の原因となる茶色の構造)から分離された6つの菌類サンプルは、液中発酵プロセスによってL-アスパラギナーゼを産生しました。最高の活性を示したのは、2.7 U/gのOS02株でした。この株は、応答曲面法の中心複合設計によるL-アスパラギナーゼ産生の最適化のために選択されました。最大の酵素産生(11.45 U/g)を得るには、L-アスパラギンを添加し、32.5 � C、190 rpmでpH 7.4に調整した改良Czapek Dox培地が最適な条件でした。

結論:市販の細菌性 L-アスパラギナーゼのタンパク質工学に関して、部位特異的変異誘発法を用いて L-アスパラギナーゼプロテアーゼ耐性を獲得しました。これは、新しい大腸菌 L-アスパラギナーゼ (EcAII) 変異体、三重変異体です。予備的結果では、変異酵素が大腸菌 BL21 (DE3) で発現し、元の L-アスパラギナーゼ活性が保持されていることが示されました。これらの L-アスパラギナーゼプロテオフォームは、ALL 治療の結果をさらに改善する可能性のある代替バイオ医薬品となる可能性があります。