HIV とレトロ ウイルスのジャーナル オープンアクセス

抽象的な

中東呼吸器症候群コロナウイルス（MERS-CoV）の毒性全長cDNAクローンの確立

朱龍超

MERS-CoV感染性クローンは、ウイルスタンパク質機能およびウイルス-宿主相互作用を研究するための重要なプラットフォームです。本研究では、Vero細胞に適合したMERS-CoVの感染性cDNAクローン（MERS-CoV-HKU）を、クラスII制限部位BsmBIベースのシームレスクローン技術を使用して生成しました。そのゲノムは12の連続した断片のパネルに分割され、その後、BsmBIを挟んでPCRによって増幅されました。断片はさらに、エンドヌクレアーゼBsmBIの消化によって形成された独自のジャンクションを使用して、2回のクローニングで細菌人工染色体（BAC）に組み立てられました。ゲノム内の2つのBsmBI制限部位はサイレント変異によって除去され、icMERS-CoV-HKUの分子マーカーとして設定されました。最後に、BACのCMVプロモーターの下流にあるMERS-CoV-HKUの全長が回収されました。

野生型HCoV-EMC/2012株と比較すると、感染性クローンから回収されたMERS-CoV-HKUは、Vero細胞およびHuh7細胞で高い力価を示しました。遺伝子解析により、非構造タンパク質（nsp2、nsp3、nsp14、nsp16）および構造タンパク質（Spike、ORF5、N）の遺伝子改変が見つかりました。同義変異は、nsp2（A2169C）、nsp3（C6172T、A6954G）、nsp14（C19514T）、nsp16（T21423G）、S（A22367G、T24093A）、およびN（T29149A）に配置されました。 nsp3 (C6172T、A6954G)、S (C25217T)、および N (A29574T) に非同義変異が見つかり、nsp3 (T198I、D1702Y)、S (S1251F)、および N (S192T) のアミノ酸変異につながっています。驚いたことに、S2 領域と ORF5 領域にそれぞれ 3 つのアミノ酸「SHY」挿入と 4 つのヌクレオチド「TTTA」欠失が見つかりました。

以前の研究によると、BatCoV-HKU4とBatCoV-HKU25のRBDはヒトDPP4受容体を認識できますが、BatCoV-HKU5のRBDは認識できません。MERS-CoVとBatCoVの関係を解明するために、MERS RBD領域をBatCoV-HKU4、BatCoV-HKU5、およびBatCoV-HKU25のRBDに置き換えたMERS-CoV感染性クローンとキメラMERS-CoV感染性クローンが生成されました。組み換えMERS-CoV感染性クローンは、VeroおよびHuh7細胞株での複製をさらに評価しました。

当社の組み換え MERS-CoV 感染性クローンには、コロナウイルスの種間伝播と病原性の研究において重要な役割があることが示されています。