糖尿病研究および内分泌学ジャーナル オープンアクセス

抽象的な

ユーロ糖尿病 2019: 膵臓自己抗原の免疫優性ペプチドの同定のための HLA-DR3、DQ2 トランスジェニック マウス - ロッシーノ R- カリアリ大学

ロッシーノR

背景: 1 型糖尿病 (1 型糖尿病) は、免疫系が膵臓のインスリンを分泌するベータ細胞を破壊することで起こる糖尿病の一種です。その結果、低血糖因子が不足し、血液中のアルドヘキソースが増加します。認められる症状は、喉の渇き、食欲の増加、頻尿、体重減少です。1 型糖尿病は抗体検査で診断されます。内因性インスリン産生を測定する C ペプチド検査も使用できます。

インスリンの調整は生存に不可欠です。インスリン治療は、通常、日常的な運動を妨げない範囲で継続する必要があります。糖尿病は、通常、個人で管理されていますが、一部の人にとっては困難です。糖尿病を治療しないと、多くの混乱が生じる可能性があります。重度の混乱には、糖尿病性ケトアシドーシスと非ケトン性高浸透圧性トランス状態が含まれます。高血糖として知られている最終的な混乱には、心臓疾患、腎不全、足の潰瘍、脳卒中、視覚障害（眼関連疾患）が含まれます。混乱は、過度の低血糖薬の投与によって引き起こされる低アルドヘキソースから発生する可能性があります。

目的:サルデーニャ人は、インスリン依存性自己免疫性糖尿病 (T1DM) の発症率が世界で最も高い国の一つです (0～14 歳の 100,000 人中 38 人)。これは、遺伝的異質性が低く、HLA-DR3-DQ2 ハプロタイプの頻度が高いことと関連しています。この HLA ハプロタイプは、T1D、セリアック病、多発性硬化症のリスクが高いことを示しています。この研究の目的は、a) プレプロインスリンおよび GAD65 膵臓自己抗原の免疫優勢 T 細胞エピトープを特定し、これらの自己抗原で HLA-DR3-DQ2 トランスジェニック マウスを免疫し、T 細胞特異的ハイブリドーマを誘導すること、および b) T 細胞の活性化を起こさずに HLA クラス II 分子に結合できるこれらのエピトープの変異ペプチドを設計することです。

方法。NOD 背景の HLA-DR3-DQ2、ヒト CD4、IA クラス II KO トリプルトランスジェニックマウスをヒト PPI および GAD65 自己抗原で免疫し、抗原特異的 T 細胞を生成します。これらの細胞を BW5147 細胞株と融合して T 細胞ハイブリドーマを生成し、PPI および GAD65 の重複ペプチドでハイブリドーマを刺激して IL-2 産生を測定することで、特異的 T 細胞応答を特定します。PPI および GAD65 は、in vitro で生成され、精製され、各マウスを 100 μg の抗原で免疫するために定量化されます。重複 PPI および GAD65 13 Mer ペプチドのペプスキャンは、Alphalyse Company から購入します。

結果: T 細胞応答の改善と抗原特異的 T 細胞ハイブリドーマの生成を目的として、当初 C57BL/6 で得られた HLA-DR3-DQ2 トランスジェニック マウスをクラス II KO ヒト CD4 NOD マウスに戻し交配しました。これらの動物は、マウスのクラス II 分子が存在しない NOD マウス (自然発生ヒト T1DM の動物モデル) の自己免疫背景を維持するため、免疫化に適しています。現在、これらの動物は入手され、当社の動物施設で飼育されています。さらに、PPI と GAD65 の両方を生成する発現ベクターが生成されました。

結論:本研究では、HLA、DR3、および HLA DQ2 分子によって提示される PPI および GAD65 膵臓自己抗原のより免疫原性の高い部分が特定されます。この情報は、T 細胞の活性化を誘発することなく糖尿病誘発性 HLA クラス II 分子に結合できる変異ペプチドを構築するために使用され、T1DM のペプチドワクチンの可能性が提供されます。