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抽象的な

アドバンストクロマトグラフィー 2020: エビの酵素加水分解による抗酸化ペプチドの精製と特性評価 - 劉雪琴 - 江蘇海洋大学

劉雪琴

導入：

機械加工で得られた Penaeus kerathurus のエビの頭を、業務用トリプシン (0.1%) で加水分解しました。加水分解反応は、化合物の熱不活性化 (95°C) とそれに続く遠心分離によって終了しました。生成されたタンパク質加水分解物は、タンパク質含有量、絶対遊離アミノ酸 (FAA)、総変動必須窒素 (TVB-N) の生化学分析、および電気泳動 SDS-PAGE プロファイルによって描写されました。乳化限界、脂肪吸着、起泡性などの実用特性が評価されました。粗エビの頭タンパク質と比較して、酵素加水分解の結果は、タンパク質含有量と FAA (17.22%) の顕著な増加 (p < 0.05) を示しました。この試験で使用された低濃度のトリプシンは基質を可溶化するのに十分であり、高タンパク質含有量と TVB-N レベル (< 6mg/100g) をもたらしましたが、これは海産物に対して構築可能なレベルよりも大幅に低いものでした。

エビの残渣は、タンパク質やタンパク質分離物と複合体を形成するアスタキサンチンの重要な供給源であり、カロテノイドは抗酸化作用を持つことが知られています。細菌プロテアーゼを使用してエビの残渣の加水分解を改善し、抗酸化作用に富むタンパク質封入体を得るための試験が行われました。残渣への特異的触媒固定、孵化温度と時間の3つのプロセス要因が、カロテノイドの回復、タンパク質含有量、トリクロロ酸（TCA）可溶性ペプチド化合物、およびジフェニルピクリルヒドラジルクロリド（DPPH）探索活性に及ぼす影響を、部分要因計画を使用して評価しました。エビなどの貝類の加工では、エビの総重量の約35〜45％を占める大量の固形廃棄物が発生します。これらはすぐに貴重な宝石を無駄にし、健康上の問題を引き起こします。さらに、エビはタンパク質、キチン、カロテノイド、栄養素の豊富な供給源であるため、最近ではこれらの重要な成分を美容製品として回収する価値が非常に高いことが証明されています。

Astaxanthin is the significant carotenoid present in scavanger squander, and happens as carotenoprotein buildings, where carotenoids are bound to proteins. Complexing of carotenoids to protein brings about presentation of different hues in shellfish and gives soundness to carotenoids, which are in any case entirely insecure. Endeavors have been made to recuperate carotenoids from shrimp squander either as carotenoids or as carotenprotein complex. Studies have been done on recuperation of carotenoids and carotenoproteins from shellfish squander. Carotenoids from shrimp squander have been recuperated utilizing dissolvable extraction and oil extraction and its security under various stockpiling conditions has been accounted for. Enzymatic hydrolysis of shrimp squander was found to improve the oil extractability of carotenoids. Carotenoproteins from shrimp waste can be confined by enzymatic and maturation methods. Chelating operators like EDTA and the proteolytic compound trypsin has been utilized to recuperate carotenoprotein from shrimp squander. Trypsin hydrolysis of snow crab squander followed by ammonium sulfate precipitation yielded carotenoprotein with expanded carotenoid content. Sea life organic cancer prevention agent peptides have become a hotpots in multidisciplinary research, for example, current biomedicine. Hydrolysis of shrimp squander with proteases was found to upgrade the carotenoid recuperation. Carotenoids happen as a complex with protein in scavangers and proteases upset the protein-carotenoid bond, along these lines expanding the carotenoid recuperation. Protease treatment for long time upgraded carotenoid recuperation when the objective is to recoup carotenoid either by oil or dissolvable extraction. Be that as it may, if the objective is to separate carotenoprotein, extraordinary hydrolysis may totally disturb this security bringing about lower carotenoid content in the protein detach. Accordingly controlled hydrolysis of shrimp squander with proteases with lower catalyst level at lower temperature will help in acquiring the protein disconnect wealthy in carotenoid content. Shrimp squander is a significant wellspring of astaxanthin, which happen as a complex with proteins, and protein confines just as carotenoids are known to have cell reinforcement movement. Examinations were done to streamline hydrolysis of shrimp squander utilizing a bacterial protease to get cell reinforcement movement rich protein segregate. The impact of three procedure factors in particular chemical fixation to squander, brooding temperature and time on carotenoid recuperation, protein content, trichloro acidic corrosive (TCA) solvent peptide substance and DiPhenyl Picryl Hydrazylchloride (DPPH) rummaging movement was assessed utilizing a partially factorial structure. A high connection coefficient (>0.90) between the watched and the anticipated qualities showed the fittingness of the plan utilized. Most extreme carotenoid recuperation was gotten by hydrolysing the shrimp squander with 0.3 % chemical for 4 h. DPPH radical rummaging action of carotenoprotein confine was especially influenced by protein focus, temperature and time of hydrolysis. The examination showed that so as to acquire the carotenoprotein from shrimp squander with higher carotenoid content hydrolysing with a catalyst grouping of 0.2–0.4 %, at lower temperature of 25–30° upto 4 h is perfect. Be that as it may, so as to get the protein disengage with expanded cancer prevention agent movement hydrolysing at higher temperature of 50 °C, with higher catalyst convergence of 0.5 % for shorter length is increasingly perfect.

方法：

頭部と甲羅を含む Penaeus indicus のエビ廃棄物は、近隣の市場から収集され、冷蔵状態で研究センターに運ばれました。材料は、使用前に卓上垂直成形機 (Robo-Coupe) で均質化されました。加水分解には、M/s Genencor の細菌性プロテアーゼである Alcalase を使用しました。この研究では、エビ糊の凍結乾燥粉末を原料として使用し、エビ糊原料から分離したプロテアーゼ産生株によって生成されたプロテアーゼを加水分解しました。

結果：

10gのエビ粉末を50mLの精製水で分解し、1M HClを使用して混合物のpHを6.0に調整しました。次に、ST-1プロテアーゼを触媒と基質の比率で添加しました。混合物を振とうしながら50 â„ÂÆ'で培養しました。6時間の孵化後、混合物を100 â„ÂÆ'で15分間加熱してST-1プロテアーゼを不活性化しました。液体沈殿:混合物を40 â„ÂÆ'に冷却し、回転蒸発させて水を除去しました。次に無水エタノールを添加し、混合物を12時間放置しました。この配列を 8000 rpm で 15 分間遠心分離し、上清を真空下で乾燥させてエビの接着剤ペプチド (SP) を取得し、これをゲルセクション G-25 で分離して除去しました。

結論：

抗酸化作用試験の結果、成分 3 は高い抗酸化作用を示すことが示されました。成分 3 は、RP-HPLC (逆相高速液体クロマトグラフィー) で収集および分離され、4 つの成分が取得されました。分離された抗酸化ペプチドは、高い DPPH 検出作用、特に優れた水酸化物およびスーパーオキシドアニオン検出活性を示します。抗酸化ペプチドは、医療、治療、健康および食品用途での開発の幅広い可能性を秘めています。